反相液相色譜法測定硝基酚類物質

[目的要求]

1、了解反相離子對色譜法分離離子型化合物的基本原理及操作條件。

2、掌握內(nei) 標法色譜定量分析方法。

[基本原理]

反相離子對色譜是用疏水的固定相和含有低濃度反離子的極性緩衝(chong) 液作流動相進行色譜分離的一種方法。它可以用於(yu) 離子型或可解離化合物的分離，有代替離子交換色譜的趨勢，成為(wei) 液相色譜的一個(ge) 很有生氣的組成部分。容易被接受的機製是認為(wei) 解離的溶質與(yu) 流動相中的反粒子形成疏水性離子對，然後按反相色譜的規律進行分離。反離子的大小及濃度、有機改良劑的濃度和pH值均是控製分離的重要因素。

硝基酚類是可解離的有機酸，分離時采用四丁基銨離子作為(wei) 反離子，在弱堿性條件下，硝基酚類按pKa值減小的順序流出。

內(nei) 標法是廣泛使用的色譜定量方法。在進行色譜定量之前，要選擇合適的內(nei) 標物，並準確測定校對因子。硝基酚類的測定采用2，4—二氯苯酚做內(nei) 標物。測定校對因子fi時，將一定量組分i的標準品，與(yu) 一定量的內(nei) 標物混合，進行色譜分離，測得的峰麵積分別為(wei) Ai和As，W代表重量。

進行定量分析時，將需一定量的內(nei) 標物S加入欲測的樣品中，進行色譜分離，測得的峰麵積分別為(wei) Ai′和As′ 則：

W’i 、W’  s′分別為(wei) 欲測的樣品中組分i的量和內(nei) 標物S的量

[實驗條件]：

固定相：YWG—C18；流動相：甲醇/水 55:45，含20 mmol/L四丁基溴化銨，並用KH2PO4/K2HPO4調整pH值在7.5—8.5之間。流量：1 mL/min；檢測：紫外—254 nm，0.02 AUFS；溫度：室溫；紙速：5 mm/min

標準測試：對硝基苯酚；2，4—二硝基苯酚；2，5—二硝基苯酚2，6—二硝基苯酚；2，4，6；內(nei) 標物：2，4—二氯苯酚

[操作步驟]

1、標準品溶液及內(nei) 標物溶液的配製

（1）準確稱取鄰硝基苯酚10 mg，對硝基苯酚16 mg，2，4—二硝基苯酚10 mg，2，5—二硝基苯酚6 mg，2，6—二硝基苯酚10 mg，2，4，620 mg。溶解於(yu) 50 mL甲醇，轉入100 mL容量瓶中，用水稀釋至刻度搖勻。

（2）準確稱取2，4—二氯苯酚0.3克，配成100 mL甲醇/水溶液。

2、測定校對因子Fi

將1 mL內(nei) 標物溶液與(yu) 1 mL標物溶液混合。待儀(yi) 器穩定後，注入10 μL混合液，記錄色譜圖1

1、 樣品的測定

將欲分析的樣品與(yu) 內(nei) 標物溶液混合。注入10 μL，記錄色譜圖2。根據保留數值，確定試樣中含有哪些成分。

[數據處理]

1、測量色譜圖1和圖2中各峰的麵積。

2、根據色譜圖1的數據，計算各組分的相對校正因子。

3、根據色譜圖2的數據，計算試樣中各組分的含量，g/mL