蔬果中維生素C含量的檢測方法

蔬果中維生素C含量的檢測方法

維生素C又叫抗壞血酸(Ascorbicid)，廣泛存在於(yu) 植物組織中，新鮮的水果、蔬菜中含量較多。是一種水溶性小分子生物活性物質，也是人體(ti) 需要量大的一種維生素。維生素C具有還原性(其結構式如圖1)，可以與(yu) 許多氧化劑發生氧化還原反應，因此可以利用其還原性測定維生素C的含量。目前食品中測定維生素C含量的方法主要有碘量法，是利用維生素C的氧化還原性為(wei) 基礎的一種氧化還原方法。岡(gang) 其酸度不易把握，碘需要標定且易揮發，而Vc不易穩定保存，使測定結果易出現偏差，且這種方法不適合微量分析；國標GB/T6195-1986是采用2,6一二氯靛酚滴定法。利用樣品溶液由藍色轉變為(wei) 粉紅色來辨別其滴定終點的到達。但是多數水果、蔬菜樣品其提取液都具有一定的色澤而導致滴定終點不明顯，使測定準確度降低。另外還有熒光光譜分析法 J、紫外一可見分光度法、色譜法、電化學法等，這些方法都存在著一定的局限性，如操作過程複雜，所用試劑不穩定，速度慢、背景¨幹擾大。近年來，建立的測定Vc的其他方法還有催化動力學和光度法相結合的方法，及VC傳(chuan) 感器測定方法，固定pH滴定法等。

該論文將對蔬菜、水果常用的維生素C含量的檢測方法進行綜述、比較。

1原子吸收分光光度法

利用原子吸收分光光度法問接測定維生素C的含量，是利用維生素C可以與(yu) 一些金屬離子發生氧化還原反應，通過測定反應掉的金屬離子的量，進而間接計算出維生素c的含量。

1.1以銀離子作為(wei) 氧化劑的間接原子吸收分光光度法

以銀離子作為(wei) 氧化劑的間接原子吸收分光光度法，是利用維生素C分子中的有二烯醇基具強還原性，可被硝酸銀氧化為(wei) 去氫維生素C，同時產(chan) 生黑色銀沉澱

沉澱經離心分離後，將分離得到的沉澱用硝酸溶解後，再利用原子吸收分光光度計測定銀離子的含量，從(cong) 而接測得維生素C含量，具體(ti) 測定方法如下：

配製一係列濃度的維生素C標準溶液，依次吸取一定量的維生素C標準溶液置於(yu) 10mL離心管中，分別加入2mL(1mg/mL) Ag+標準溶液，然後加水使總體(ti) 積為(wei) 4mL，搖勻，在室溫下避光放置35min離心分離棄去上清液，用2mL超純水洗滌沉澱3次，然後用l:1的濃硝酸3mL溶解沉澱，移入50mL的容量瓶中，加水稀釋至刻度。噴入空氣-乙炔火焰分別測定其吸光度，以維生素C標準溶液的濃度為(wei) 橫坐標，以測得的吸光度值為(wei) 縱坐標繪製標準曲線。後將處理過的待測樣按上述方法測定其維生素C含量。

上述方法巾維生素C標準溶液及樣品的配製都是利用2％的檸檬酸作為(wei) 溶劑，並在棕色瓶中保存，原因是維生素C在溶液中不穩定，遇氧氣、光、熱、堿性物質易受破壞，而在適當的酸性條件下比較穩定，用2％的檸檬酸溶液來配製維生素C標準溶液，減緩了維生素C被氧化的速度，同時消除了一定外界因素的十擾，使得測定結果比較穩定。

1.2 以銅離子作為(wei) 氧化劑的間接原子吸收分光光度法

文獻中報道了以銅離子作為(wei) 氧化劑的間接原子吸收分光光度法。該方法也是利用維生素C在酸性介質中維生素C可將Cu2+定量的還原為(wei) Cu+，然後Cu+與(yu) SCN-反應生成CuSCN沉澱，在高速離心機下有效地分離出CuSCN沉澱，洗滌後再經濃硝酸溶解，用原子吸收法測定沉澱中的含銅量，即可推知樣品中維生素C的含量。具體(ti) 測定方法如下：

分別吸取1mL配製的含一定量維生素C的標準溶液(隨配隨用)(分別含維生素C 50、100、200、300、400、500 μg)和樣品提取液，依次放置於(yu) 已編號的15mL離心管中，各加入1mLCuSO4飽和溶液、1mL濃度為(wei) 2％硫氰酸銨溶液、0.5mL鹽酸-醋酸鈉緩衝(chong) 液和0.5 mL飽和NaCl溶液充分混和，稍後離心分離，棄去上層清液，小心地用少量水洗滌沉澱2～3次(注意每次用水不能超過1 mL)，加入0.5mL硝酸溶解後，轉移至lO0mL的容量瓶中加水定容至刻度線，搖勻。分別用原子吸收分光光度計測定其含銅量，由所得的維生素C含量的標準曲線，可以得到相應樣品的試驗結果。

該方法所得的試驗結果相對標準偏差RSD在5％以內(nei) 加標回收率在96.56％～100.67％，其精密度和準確度均達到痕量分析要求。此方法的線性相關(guan) 係數R=O 9989，表明相關(guan) 性很好。

2紫外可見分光光度法

利用紫外分光光度法測定維生素C的含量是基於(yu) 維生素c在紫外光區有特征吸收，但是因為(wei) 維生素C結構中具有不飽和鍵，具有還原性，不易穩定存在，直接測定誤差較大。所以在利用紫外分光光度法測定時，維生素標準溶液和待測樣的配製條件非常重要。曾國富，黃玉英研究發現，維生索C在CTAB-C5H11OH-H2O微乳液體(ti) 係中非常穩定，它存在於(yu) 微乳液滴膜的內(nei) 側(ce) ，與(yu) 滲透進入液滴膜外側(ce) 的溶液氧接觸的機會(hui) 極少，該體(ti) 係能極大地提高維生素C的穩定性。

鄭京平等利用維生素C具有對紫外產(chan) 生吸收和對堿穩定的特性，建立了紫外分光光度快速測定水果、蔬菜維生素c的新方法。根據維生素C具有對紫外產(chan) 生吸收和對堿不穩定的特性，於(yu) 波長243nm處測定樣品溶液與(yu) 堿處理樣品兩(liang) 者吸光度之差，通過查校準曲線，即可計算樣品巾維生素C的含量。此法操作簡單、快速準確、重現性好，結果令人滿意。特別適合含深色樣品的測定。實驗結果表明該方法簡單易行，結果準確、靈敏度高，檢出限低，可快速測定水果、蔬菜中維生素C，值得推廣應用。

張立科等介紹了在0～450μg／mL線性範圍內(nei) ，以cu2+作催化劑，以溶解氧將還原型維生素C氧化為(wei) 在246.0 nm處無吸收的氧化型Vc，實現了樣品各紫外幹擾成分的本底校正，建立了種測定果蔬Vc的新方法。該方法中維生素C破壞條件的選擇尤為(wei) 重要，確定條件為(wei) ：Cu用量為(wei) 30 g，反應溫度為(wei) 70℃，反應時間為(wei) 20min，加熱條件下，反應速度快，無需加掩蔽劑。方法簡便、快速、準確，測定了香蕉、西紅柿等果蔬中的VC含量，結果令人滿意。經多次實驗得出該方法RsD在0.32％～0.89％之間，實際測定了香蕉、西紅柿等樣品中的VC的含量，檢出限為(wei) 0.2791g／mL，加標回收率在97.16％～100.18%之間 。

3液相色譜法

前麵介紹的方法由於(yu) 在使用中有一定的限製，操作複雜、前處理較麻煩。因此在使用中有較大的局限性，目的已逐漸被液相色譜法所取代。HPLC法具有檢測速度快、操作簡單、實驗結果可靠等特點。

王豔穎，薑國斌等采用HYPERSIL-C8fz譜柱、濃度0.1％的草酸作流動相的液相色譜法，分析了草莓中的維生素c含量，取得了的效果。HPLC檢測條件如下：

流動相0.1％草酸溶液，流速1.0 mL/min；檢測波長254 nm，進樣量5μL，柱箱溫度3O℃。該方法分析中受樣品中其他雜質的影響較小。測定草莓中維生素C的含量，回收率為(wei) 97.4％～102.1％，說明該方法具有所需試劑少、穩定、操作簡便等特點。精密度實驗的相對標準偏差小於(yu) 3％，說明該方法重複性和再現性都是比較高的。

陳昌雲(yun) 等采用0.05 mol／L磷酸二氫鉀緩衝(chong) 液：甲醇=80:20(v／v)作流動相。流速為(wei) 1.0 mL／min，二極管陣列檢測器，檢測波長為(wei) 254 nm。測定蜜柚中維生素C含量在質量濃度為(wei) 20～100mg／L範圍內(nei) 有良好的線性關(guan) 係，方法回收率為(wei) 92.4％～107.5％,相對標準偏差小於(yu) 2％。

4 結語

測定維生素C含量方法很多，各種方法各有優(you) 缺點，因為(wei) 維生素C自身的不穩定，導致了很多方法測定結果誤差較大，所以對維生素C穩定存在條件的探索非常重要。液相色譜法因為(wei) 測定較準確、靈敏度高、選擇性好，有較好的發展前景，是目前發展較快的一種方法。